Penggunaan Kaedah 2d-Page Untuk Kajian Pengekspresan Protein Semasa Embriogenesis Puntius gonionotus
Pengekspresan protein dapat dikesan dengan menggunakan elektroforesis 2-dimensi (2-DE) dan hasilnya adalah suatu elektroferogram. Elektroferogram ini kemudiannya perlu diwarnakan bagi menghasilkan suatu peta protein. Peta protein yang terhasil ini merupakan kajian kuantitatif bagi memerhati peru...
Saved in:
Main Author: | |
---|---|
Format: | Thesis |
Language: | English |
Published: |
2004
|
Subjects: | |
Online Access: | http://psasir.upm.edu.my/id/eprint/26/1/1000548945_t_FBSB_2004_8.pdf |
Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
id |
my-upm-ir.26 |
---|---|
record_format |
uketd_dc |
spelling |
my-upm-ir.262015-05-12T08:38:35Z Penggunaan Kaedah 2d-Page Untuk Kajian Pengekspresan Protein Semasa Embriogenesis Puntius gonionotus 2004-10 Ahmat @ Amiruddin, Suhaida Pengekspresan protein dapat dikesan dengan menggunakan elektroforesis 2-dimensi (2-DE) dan hasilnya adalah suatu elektroferogram. Elektroferogram ini kemudiannya perlu diwarnakan bagi menghasilkan suatu peta protein. Peta protein yang terhasil ini merupakan kajian kuantitatif bagi memerhati perubahan protein yang diekspreskan oleh sesuatu tisu, sel mahupun bendalir badan. Kajian ini dapat mengenal pasti protein yang hadir atau juga yang hilang ketika proses embriogenesis berlaku . Dalam kerja selidik ini, pengekspresan protein semasa embriogenesis Puntius gonionotus telah menunjukan protein tersebut mengalami perubahan semasa melalui tujuh fasa perkembangan yang dikaji. Matlamat utama penyelidikan ini adalah bertujuan untuk memajukan kaedah 2-DE bagi mengkaji perubahan protein yang berlaku semasa embriogenesis. Bagi memajukan kaedah ini beberapa kerja preliminari dijalankan terlebih dahulu, iaitu pemilihan penimbal lisis, peratusan gel dan juga pewarnaan gel yang sesuai. Elektroforesis dua–dimensi (2-DE) merupakan suatu kaedah yang digunakan dalam mengkaji ekspresi protein secara keseluruhan dalam sesuatu sampel. Melalui kaedah ini, campuran protein kompleks dapat dipisahkan dalam gel poliakrilamida berdasarkan cas dan berat molekul protein tersebut. Pemilihan penimbal lisis yang sesuai perlu dilakukan berikutan tiada satu pun kaedah penyediaan sampel yang dapat digunakan secara universal bagi mengekstrak semua jenis protein yang terkandung dalam setiap sampel yang dikaji. Oleh yang demikian, bagi melakukan perbandingan, beberapa jenis penimbal lisis berdasarkan kepada kaedah Görg et al. (2000) dan Kanaya et al. (2000) samada yang vi asal dan juga yang telah diubahsuai serta penimbal Triton X-100 telah digunakan. Seterusnya ekstrak-ekstrak protein tersebut dinilai melalui elektroforesis 1-dimensi. Penimbal lisis Kanaya et al. (2000) yang telah diubahsuai adalah didapati larutan pengekstrak yang paling berkesan bagi melarutkan protein telur Puntius gonionotus. Penggunaan penimbal ini dapat menghasilkan jumlah jalur protein yang paling banyak dalam pemisahan elektroforesis 1-dimensi. Penimbal lisis ini seterusnya telah digunakan untuk mengekstrak protein dari beberapa fasa embriogenesis Puntius gonionotus. Seterusnya, penentuan peratusan gel yang sesuai pula telah dilakukan dengan menggunakan empat jenis peratusan gel yang berbeza. Ia amat penting dalam memastikan julat pengasingan protein yang dikaji adalah luas. Didapati SDS-PAGE yang mempunyai peratusan gel 12% telah dipilih berikutan ia berjaya mengasingkan protein dalam julat yang luas. Langkah terakhir bagi memajukan kaedah ini, pemilihan kaedah pewarnaan gel pada elektroferogram yang dihasilkan dilakukan. Ia dilakukan untuk mengesan protein yang telah dipisahkan. ’Coomassie Brilliant Blue R-250’ dan pewarnaan ‘silver’ telah dipilih untuk dilakukan perbandingan. Peta protein merupakan hasil akhir yang diperolehi dan ia hanya berjaya diwarnakan melalui pewarnaan ‘silver’. Melalui peta protein yang diperolehi didapati, degradasi dan sintesis protein berlaku sepanjang proses embriogenesis. Terdapat protein baru dihasilkan bagi setiap fasa embriogenesis. Namun begitu, ada juga protein yang tidak dapat dikesan setelah melalui fasa perkembangan embrio tersebut. Boleh dikatakan kebanyakan protein yang diperolehi adalah bersifat basik dengan julat pH diantara pH 7.5 - pH 10 Proteins - Analysis - Research Protein engineering 2004-10 Thesis http://psasir.upm.edu.my/id/eprint/26/ http://psasir.upm.edu.my/id/eprint/26/1/1000548945_t_FBSB_2004_8.pdf application/pdf en public masters Universiti Putra Malaysia Proteins - Analysis - Research Protein engineering Faculty of Biotechnology and Biomolecular Sciences |
institution |
Universiti Putra Malaysia |
collection |
PSAS Institutional Repository |
language |
English |
topic |
Proteins - Analysis - Research Protein engineering |
spellingShingle |
Proteins - Analysis - Research Protein engineering Ahmat @ Amiruddin, Suhaida Penggunaan Kaedah 2d-Page Untuk Kajian Pengekspresan Protein Semasa Embriogenesis Puntius gonionotus |
description |
Pengekspresan protein dapat dikesan dengan menggunakan
elektroforesis 2-dimensi (2-DE) dan hasilnya adalah suatu
elektroferogram. Elektroferogram ini kemudiannya perlu diwarnakan
bagi menghasilkan suatu peta protein. Peta protein yang terhasil ini
merupakan kajian kuantitatif bagi memerhati perubahan protein yang
diekspreskan oleh sesuatu tisu, sel mahupun bendalir badan. Kajian
ini dapat mengenal pasti protein yang hadir atau juga yang hilang
ketika proses embriogenesis berlaku .
Dalam kerja selidik ini, pengekspresan protein semasa embriogenesis
Puntius gonionotus telah menunjukan protein tersebut mengalami
perubahan semasa melalui tujuh fasa perkembangan yang dikaji.
Matlamat utama penyelidikan ini adalah bertujuan untuk memajukan
kaedah 2-DE bagi mengkaji perubahan protein yang berlaku semasa
embriogenesis.
Bagi memajukan kaedah ini beberapa kerja preliminari dijalankan
terlebih dahulu, iaitu pemilihan penimbal lisis, peratusan gel dan juga
pewarnaan gel yang sesuai. Elektroforesis dua–dimensi (2-DE)
merupakan suatu kaedah yang digunakan dalam mengkaji ekspresi
protein secara keseluruhan dalam sesuatu sampel. Melalui kaedah ini,
campuran protein kompleks dapat dipisahkan dalam gel
poliakrilamida berdasarkan cas dan berat molekul protein tersebut.
Pemilihan penimbal lisis yang sesuai perlu dilakukan berikutan tiada
satu pun kaedah penyediaan sampel yang dapat digunakan secara
universal bagi mengekstrak semua jenis protein yang terkandung
dalam setiap sampel yang dikaji. Oleh yang demikian, bagi
melakukan perbandingan, beberapa jenis penimbal lisis berdasarkan
kepada kaedah Görg et al. (2000) dan Kanaya et al. (2000) samada yang
vi
asal dan juga yang telah diubahsuai serta penimbal Triton X-100 telah
digunakan. Seterusnya ekstrak-ekstrak protein tersebut dinilai melalui
elektroforesis 1-dimensi. Penimbal lisis Kanaya et al. (2000) yang telah
diubahsuai adalah didapati larutan pengekstrak yang paling berkesan
bagi melarutkan protein telur Puntius gonionotus. Penggunaan
penimbal ini dapat menghasilkan jumlah jalur protein yang paling
banyak dalam pemisahan elektroforesis 1-dimensi. Penimbal lisis ini
seterusnya telah digunakan untuk mengekstrak protein dari beberapa
fasa embriogenesis Puntius gonionotus.
Seterusnya, penentuan peratusan gel yang sesuai pula telah dilakukan
dengan menggunakan empat jenis peratusan gel yang berbeza. Ia amat
penting dalam memastikan julat pengasingan protein yang dikaji
adalah luas. Didapati SDS-PAGE yang mempunyai peratusan gel 12%
telah dipilih berikutan ia berjaya mengasingkan protein dalam julat
yang luas.
Langkah terakhir bagi memajukan kaedah ini, pemilihan kaedah
pewarnaan gel pada elektroferogram yang dihasilkan dilakukan. Ia
dilakukan untuk mengesan protein yang telah dipisahkan. ’Coomassie
Brilliant Blue R-250’ dan pewarnaan ‘silver’ telah dipilih untuk
dilakukan perbandingan. Peta protein merupakan hasil akhir yang
diperolehi dan ia hanya berjaya diwarnakan melalui pewarnaan
‘silver’.
Melalui peta protein yang diperolehi didapati, degradasi dan sintesis
protein berlaku sepanjang proses embriogenesis. Terdapat protein
baru dihasilkan bagi setiap fasa embriogenesis. Namun begitu, ada
juga protein yang tidak dapat dikesan setelah melalui fasa
perkembangan embrio tersebut. Boleh dikatakan kebanyakan protein
yang diperolehi adalah bersifat basik dengan julat pH diantara pH 7.5
- pH 10 |
format |
Thesis |
qualification_level |
Master's degree |
author |
Ahmat @ Amiruddin, Suhaida |
author_facet |
Ahmat @ Amiruddin, Suhaida |
author_sort |
Ahmat @ Amiruddin, Suhaida |
title |
Penggunaan Kaedah 2d-Page Untuk Kajian Pengekspresan Protein Semasa Embriogenesis Puntius gonionotus |
title_short |
Penggunaan Kaedah 2d-Page Untuk Kajian Pengekspresan Protein Semasa Embriogenesis Puntius gonionotus |
title_full |
Penggunaan Kaedah 2d-Page Untuk Kajian Pengekspresan Protein Semasa Embriogenesis Puntius gonionotus |
title_fullStr |
Penggunaan Kaedah 2d-Page Untuk Kajian Pengekspresan Protein Semasa Embriogenesis Puntius gonionotus |
title_full_unstemmed |
Penggunaan Kaedah 2d-Page Untuk Kajian Pengekspresan Protein Semasa Embriogenesis Puntius gonionotus |
title_sort |
penggunaan kaedah 2d-page untuk kajian pengekspresan protein semasa embriogenesis puntius gonionotus |
granting_institution |
Universiti Putra Malaysia |
granting_department |
Faculty of Biotechnology and Biomolecular Sciences |
publishDate |
2004 |
url |
http://psasir.upm.edu.my/id/eprint/26/1/1000548945_t_FBSB_2004_8.pdf |
_version_ |
1747810150573408256 |