Pengklonan dan Pengekspresan Gen Xilanase Termostabil daripada Bacllus Coagulans St-6 ke dalam Escherichia Coli HB101
Bacillus coagulans ST-6 merupakan bakteria termofilik yang berupaya mengekspreskan aktiviti xilanase termostabil. Gen xilanase tersebut telah beIjaya diklonkan dengan menyelitkan serpihan DNA daripada genom B. coagu/ans ST-6 yang telah dipotong oleh enzim Bam HI ke dalam tapak Bam HI yang terdapa...
Saved in:
| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | Thesis |
| Language: | English Malay |
| Published: |
1996
|
| Subjects: | |
| Online Access: | http://psasir.upm.edu.my/id/eprint/8603/1/FSAS_1996_11_A.pdf |
| Tags: |
Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
|
| Summary: | Bacillus coagulans ST-6 merupakan bakteria termofilik yang berupaya
mengekspreskan aktiviti xilanase termostabil. Gen xilanase tersebut telah beIjaya
diklonkan dengan menyelitkan serpihan DNA daripada genom B. coagu/ans ST-6 yang
telah dipotong oleh enzim Bam HI ke dalam tapak Bam HI yang terdapat di dalam
vektor pBR322. Seterusnya plasmid rekombinan tersebut ditransformasikan ke dalam
Eshcerichia coli HB101 dan koloni yang mengandungi gen xilanase dipilih dengan
menggunakan agar media bercampur substrat RBB-xilan. Daripada 3,270 transforman
yang terpilih, hanya dua koloni didapati mengekspreskan aktiviti xilanase iaitu dengan
kewujudan zon cerah di sekelilingnya. Penyaringan seterusnya mendapati hanya satu
koloni sahaja yang stabil untuk kajian selanjutnya. Plasmid rekombinan tersebut
dinamakan sebagai pBNX. Pemotongan plasmid pBNX dengan enzim Bam HI
mendapati DNA selitan tersebut bersaiz 2.56 kb. Kajian selanjutnya menunjukkan ia
mengandungi tapak pemotongan bagi enzim Hind 111, Sal 1 dan &0 RV tetapi tiada tapak bagi enzim Eco R1, Pst 1, Kpn 1 dan Sac 1. Keputusan daripada penghibridan
dengan prob DNA selitan melalui kaedah pemblotan Southern telah mengesahkan
DNA selitan bagi plasmid rekombinan (pBNX) tersebut berasal daripada B. coagu/ans
ST-6. Enzim xilanase kasar yang dihasilkan oleh klon tersebut menunjukkan ciri-ciri
yang sarna dengan enzim xilanase kasar daripada B. coagu/ans ST-6, di mana suhu dan
pH optimumnya adalah SOoC dan 7.2. Enzim xilanase daripada E. coli (PBNX) dan B.
coagulans ST-6 juga stabil pada suhu 60˚C. Pengsubklonan DNA selitan dalam
plasmid pBNX ke dalam pUC19 dan pUC18 juga telah dilakukan dan kedua-duanya
mengekspreskan aktiviti xilanase. Plasmid kedua-duanya dikenali sebagai pBNXl dan
pBNX2. Tindakbalas dengan enzim pembatas Sal 1 menunjukkan cara kemasukan
DNA selitan dalam kedua-dua subklon mempunyai orientasi yang sama. |
|---|